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Molekularbiologische Methoden

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Popis knihy

Inhaltsverzeichnis 1. Das Leben und seine Bestandteile 12 1.1. Der Aufbau von DNA und RNA 13 1.2. Der genetische Code 15 1.3. Die Gene 16 1.3.1. Die Genstruktur in Prokaryonten 18 1.3.2. Genstruktur in Eukaryonten 19 1.4. Die Proteine 21 1.5. Die Zelle 23 2. Grundlagen der Arbeit im Labor 25 2.1. Wasser 25 2.2. Messung des pH-Wertes 26 2.3. Puffer 27 2.4. Waagen 28 2.5. Mikropipetten 29 2.6. Gefäße im Labor 30 2.7. Zentrifugen 30 2.8. Mischen und Konzentrieren 33 2.9. Konzentrieren 33 2.10. Pufferwechsel 34 2.11. Proben-Lagerung 34 2.12. Steriles Arbeiten 35 2.13. Die kleinen Freunde - Pflege und Aufzucht von Escherichia coli 37 2.13.1. Nährmedien 38 2.13.2. Antibiotika 40 2.13.3. Lagerung von Bakterien 42 2.14. Der Aufschluss von Geweben 43 3. Aufreinigung von Nukleinsäuren 46 3.1. Gegenspieler erfolgreicher DNA- und RNA-Isolationen 46 3.1.1. Nukleasen 47 3.1.2. Scherkräfte 48 3.1.3. Chemische Verunreinigungen 48 3.1.4. EDTA und zweiwertige Ionen: das Yin und Yang der Molekularbiologie 49 3.2. Extraktion von Nukleinsäuren 49 3.2.1. Der Extraktionspuffer 49 3.3. Die weitere Aufreinigung der DNA 51 3.3.1. Phenolextraktion 52 3.3.2. Ethanolfällung 53 3.3.3. Isopropanolfällung 55 3.3.4. PEG Fällung 55 3.3.5. Entfernen von Polysacchariden mit CTAB 55 3.3.6. Silikamatrices 56 3.3.7. Tropfendialyse 57 3.4. Einige ausgewählte DNA-Aufreinigungsmethoden 57 3.4.1. Die Plasmidpräparation aus E. coli 57 3.4.2. Die Isolation von DNA aus Pflanzen mit CTAB 59 3.4.3. Isolation von DNA aus Blut oder Zellkulturen 60 3.4.4. Isolation hochmolekularer DNA 61 3.5. Die Isolation von RNA 61 3.6. Übersicht über den Einsatz von Kits 64